BD流式细胞仪Z常见的几种检测方式

　　一、BD流式细胞仪测定用乙醇固定的DNA的含量
　　1、培养细胞的DNA含量的测定
　　制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中；加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存；
　　细胞固定的一般步骤为：
　　1)取单细胞悬液1～2×106个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中；
　　2)300g离心5分钟，弃上清，反复两次；
　　3)重悬细胞于0.5ml PBS缓冲液中；
　　4)将细胞悬液放置于2～3ml冷70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。
　　注意：
　　·根据实验的要求，固定剂也可选用1～3%多聚甲醛；
　　·将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0～4℃；
　　·细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团。
　　·300g离心5分钟，去上清，再重悬于400μl PBS中；
　　·显微镜下观察，若有明显的黏附，须再用筛网过滤；
　　·加入PI，避光孵育30分钟；
　　·上BD流式细胞仪检测。
　　2、新鲜组织的DNA含量的测定
　　1)用200mg湿重组织用机械法制成单细胞悬液；
　　2)500g离心5分钟；
　　3)弃上清，重悬于10ml染色-去污剂中；
　　4)再过滤，用200目的筛网或70~80μm的筛网过滤；
　　5)上BD流式细胞仪检测。
　　3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定
　　1)从石蜡包埋切取切片50μm厚，2~3片，制成单细胞悬液；
　　2)用PBS缓冲液洗涤，500g离心5分钟，弃上清；
　　3)加入PI液1ml室温避光30分钟；
　　4)调整细胞浓度为1×106/ml；
　　5)上BD流式细胞仪检测。