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BD流式细胞仪Z常见的几种检测方式

更新时间:2017-08-07浏览:2243次
  一、BD流式细胞仪测定用乙醇固定的DNA的含量
  1、培养细胞的DNA含量的测定
  制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中;加入2ml预冷的70%乙醇,4℃保存;
  细胞固定的一般步骤为:
  1)取单细胞悬液1~2×106个细胞于PBS(PH=7.2)缓冲液中;
  2)300g离心5分钟,弃上清,反复两次;
  3)重悬细胞于0.5ml PBS缓冲液中;
  4)将细胞悬液放置于2~3ml冷70%乙醇中,混匀,保存于4℃,至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。
  注意:
  ·根据实验的要求,固定剂也可选用1~3%多聚甲醛;
  ·将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至0~4℃;
  ·细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增加,并不断震摇,以免细胞成团。
  ·300g离心5分钟,去上清,再重悬于400μl PBS中;
  ·显微镜下观察,若有明显的黏附,须再用筛网过滤;
  ·加入PI,避光孵育30分钟;
  ·上BD流式细胞仪检测。
  2、新鲜组织的DNA含量的测定
  1)用200mg湿重组织用机械法制成单细胞悬液;
  2)500g离心5分钟;
  3)弃上清,重悬于10ml染色-去污剂中;
  4)再过滤,用200目的筛网或70~80μm的筛网过滤;
  5)上BD流式细胞仪检测。
  3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定
  1)从石蜡包埋切取切片50μm厚,2~3片,制成单细胞悬液;
  2)用PBS缓冲液洗涤,500g离心5分钟,弃上清;
  3)加入PI液1ml室温避光30分钟;
  4)调整细胞浓度为1×106/ml;
  5)上BD流式细胞仪检测。
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