荧光定量PCR仪的理论模式讲述

　　荧光定量PCR仪以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。
　　PCR是对原始待测模板核酸的一个扩增过程，任何干扰PCR指数扩增的因素都会影响扩增产物的量，使得PCR扩增终产物的数量与原始模板数量之间没有一个固定的比例关系，通过检测扩增终产物很难对原始模板进行准确定量。近年来研究人员通过大量的实践，研究了相对准确的定量PCR方法，即荧光定量PCR仪的荧光定量PCR。
　　PCR扩增通式：
　　1.Tn=T0（1+E）n；
　　2.Tn=Tn-1（1+E）n。
　　注：其中E表示扩增效率，n为循环数，Tn表示在n个周期后PCR产物的数量，Tn-1表示在n-1个周期后PCR产物的数量，T0为原始模板数量。设定PCR到达指数扩增期时，产生一定的荧光高于背景为仪器所识别，此时的循环数为CP,也就是K=T0（1+E）CP，取对数即：
　　lg K=lg T0+CP*lg(1+E)；
　　CP=-1/lg(1+E)*lg T0+lgk/lg(1+E)。
　　由于对一特定的PCR而言，E与K均为常数，故上式为循环数（CP）对原始模板拷贝数的对数（lg T0）一次方程，其标准形式y=kx+b,该直线的斜率为-1/lg(1+E)，在横坐标上的截距为lgk/lg(1+E)，也是荧光定量PCR仪所谓的标准曲线。