定量PCR仪的选择误区您知道么？

　　定量PCR仪因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，难得不是实验技术上的问题而是选择哪一种荧光定量PCR仪。
　　首先建议大家走出定量PCR仪R的两个误区：
　　误区①：定量PCR仪的通道越多越好
　　随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。不少厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。在使用有些5通道的定量PCR仪时，为了确保实验结果的性和准确性都要在实验中使用ROX（一种荧光染料），这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。
　　误区②：定量PCR仪无需梯度功能
　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度（Tm值），但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出适合的反应条件。
　　不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增来说这个非常重要，因为酶的佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。