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微量分光光度计在基因克隆里的作用

更新时间:2016-07-22浏览:3200次
   微量分光光度计克隆测定奶山羊脂肪酸合酶基因启动子的全长序列,进行活性区域分析,为奶山羊FAS基因功能和表达调控机理研究提供依据.根据牛和人脂肪酸合酶基因启动子的同源序列以及西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因5UTR区域,分别设计上、下游引物,以西农萨能奶山羊全血DNA为模板克隆启动子序列.依据生物信息学分析结果重设引物,将FAS启动子基因分段克隆并连接到荧光素酶表达载体PGL-3,与Psv-β-半乳糖苷酶对照载体共转染293、MCF-7细胞,进行荧光素酶活性检测和β-半乳糖苷酶的活性检测.FAS基因启动子序列全长2 640 bp,与牛、人FAS启动子序列同源性90%以上,包括数个潜在SP1、Ets、LSF等转录因子结合位点和CCAAT框、GC框.-1 040-340 bp处可能包含启动子活性中心,通过启动子缺失片段试验将活性中心范围缩小至-721-540 bp之间.通过克隆FAS基因启动子区域,分析表明启动子前端存在负调控元件,找出了启动子小活性中心。
  基因克隆技术是生命科学技术领域里非常重要的部分,是分子生物学的核心技术,其目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝,用于深入分析基因的结构与功能,并可达到人为改造细胞以及物种遗传性状的目的。基因克隆术中目的基因的获得、目的基因和载体的连接、重组分子的扩增和鉴定等关键步骤中基础的是核酸浓度的测定,如果所用核酸浓度或者纯度不够,可能会造成实验的不理想或失败,将会浪费大量的人力物力,所以核酸浓度以及纯度的检测是*的。微量分光光度计正是测量核酸浓度以及纯度的理想仪器,自带触摸屏、涡旋,直接显示核酸浓度比值,同时有背景消除,显示核酸的紫外吸收峰图。
  微量分光光度计是测量核酸和蛋白浓度理想的选择。
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