Thermo 7500定量PCR仪需要定期进行维护和校准

　　Thermo 7500定量PCR仪采用多项技术提升性能，通过优化光路设计提高数据准确性；熔解曲线分析功能可鉴别非特异性扩增产物，确保结果可靠性。温控系统也是关键，采用高效温控模块，支持多重基因检测。
 

　　Thermo 7500定量PCR仪的使用注意事项：
 

　　1.防止污染：使用无酶核酸酶的无菌工作台和新的实验用品，减少DNA或RNA的污染。注意避免接触裸露的皮肤和呼吸PCR试剂的气雾，防止杂散污染风险。
 

　　2.试剂保存与使用：所有试剂应妥善保存，避免反复冻融。在使用前，需确认试剂的有效期和质量，如有异常应及时更换。
 

　　3.操作规范：严格按照操作规程进行实验，包括加样、混匀、离心等步骤，确保反应体系的均一性和准确性。在操作过程中，应注意避免交叉污染，如更换吸头等。
 

　　4.仪器维护：定期对定量PCR仪进行维护和校准，确保仪器的正常运行和检测结果的准确性。在使用过程中，如发现仪器异常，应及时停止实验并进行检修。

 

　　Thermo 7500定量PCR仪的测定步骤：
 

　　1.实验前准备：准备好所需的试剂(如引物、探针、DNA聚合酶、dNTP、缓冲液等)和耗材(如PCR管、移液器吸头)，检查试剂有效期及质量，并对实验环境进行无菌处理。同时，校准实时荧光，清洁操作台并消毒。
 

　　2.样本处理：提取样本中的核酸(DNA或RNA)，若为RNA需行逆转录合成cDNA。然后对核酸浓度和纯度进行检测，如通过紫外分光光度计测定A260/A280比值等。
 

　　3.反应体系配制：在冰上按照一定比例依次加入灭菌水、缓冲液、dNTP、引物、探针、DNA聚合酶及模板核酸，轻轻混匀后短暂离心，确保反应液汇集于管底，避免产生气泡。
 

　　4.PCR扩增：将装有反应液的PCR管放入定量PCR仪中，设置合适的反应程序，包括预变性、变性、退火、延伸的温度和时间等参数，并根据所使用的荧光染料或探针选择相应的荧光检测通道。
 

　　5.数据分析：反应结束后，通过仪器软件分析数据，设置基线和阈值，得到Ct值。根据标准曲线计算初始浓度，同时验证阴阳性对照及内参基因结果，判断实验有效性。