T100 PCR仪的这些知识值得我们学习

　　T100 PCR仪(聚合酶链式反应仪)是分子生物学领域中用于体外扩增特定DNA片段的核心设备，通过模拟DNA自然复制过程，在数小时内将微量DNA样本扩增至数百万至数十亿倍，被广泛应用于基因检测、疾病诊断、科研探索及工业生产等领域。
 

　　T100 PCR仪通过精确控制反应体系的温度变化，驱动DNA变性、退火、延伸三个关键步骤的循环进行，具体过程如下：
 

　　变性(Denaturation)：
 

　　温度升至94-98℃，持续20-30秒，使DNA双链解旋为单链，为后续引物结合提供模板。
 

　　退火(Annealing)：
 

　　温度降至50-65℃(依引物Tm值调整)，持续20-40秒，特异性引物与单链DNA的互补区域结合，标记扩增起点。
 

　　延伸(Extension)：
 

　　温度升至72℃(Taq DNA聚合酶最适温度)，持续30秒至2分钟，聚合酶沿引物方向合成新链，完成DNA复制。
 

　　循环次数：通常进行25-40个循环，每轮循环DNA数量呈指数增长(理论扩增倍数=2n，n为循环数)。
 

　　根据功能与设计差异，PCR仪可分为以下类型：
 

　　1.传统梯度PCR仪
 

　　特点：通过金属块均匀加热/冷却，配备梯度温度模块，可同时设置不同退火温度，快速优化反应条件。
 

　　应用：适合引物设计初期，筛选最佳退火温度(如基因克隆、突变体筛选)。
 

　　2.实时荧光定量PCR仪(qPCR)
 

　　核心升级：集成荧光检测系统，实时监测扩增产物积累，实现定量分析。
 

　　技术分支：
 

　　SYBR Green法：荧光染料嵌入DNA双链，非特异性检测所有扩增产物。
 

　　探针法(TaqMan)：使用特异性荧光探针，仅标记目标序列，灵敏度达1-10拷贝/μL。
 

　　应用：病毒载量检测(如HIV、HPV)、基因表达分析、SNP分型等。
 

　　3.数字PCR仪(dPCR)
 

　　原理创新：将反应体系分割为数万个微反应单元(如微滴、芯片孔)，通过终点法统计阳性单元比例，实现绝对定量。
 

　　优势：无需标准曲线，抗干扰能力强，可检测低至0.001%的突变频率。
 

　　应用：液体活检(循环肿瘤DNA检测)、转基因成分定量、环境微生物监测等。