荧光定量PCR仪厂家谈如何增加PCR的保真性

　　荧光定量PCR仪厂家分析PCR技术又称聚合酶链反应技术，是一种在体外扩增核酸的技术。该技术模拟体内天然DNA的复制过程。其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每一循环的产物作为下一个循环的模板，如此循环30次，介于两个引物之间的新生DNA片段理论上达到230拷贝。PCR技术的特异性取决于引物与模板结合的特异性。
　　高温DNA聚合酶是以单链DNA或RNA为模板，在dNTP和一些阳离子的存在情况下，在特定的引物指导下按3'-5'方向合成DNA.包括3种类型：
　　1.5'-3'方向的DNA合成能力,没有3'-5'方向的外切酶特性.如Taq及其突变体.这类酶的合成能力强,因为他不纠正合成中出现的突变；
　　2.与1类似,有合成活性,没有3-5的外切活性.但他们能以RNA为模板,合成DNA.如Tth DNA聚合酶；
　　3.有DNA聚合活性,没有逆转录活性,但有3-5方向的外切酶活性。但是这些聚合酶的产量比Taq DNA聚合酶低。
　　将Taq DNA聚合酶同带有3'到5'外切核酸酶活性第二种聚合酶混合在一起可以获得比单独Taq DNA聚合酶高的忠实性，并可以得到高产量及扩增长模板。
　　荧光定量PCR仪厂家解释除了酶，高浓度的dNTP或镁离子会降低忠实性。将dNTP的浓度从200μM降低到25-50μM可以增加度如果四种核苷的浓度不同，忠实性会受影响。进行较少的PCR循环也会有助于增加忠实性，因为增加循环数目和产物长度就会增加突变可能性。