BD C6流式细胞仪测定细胞周期的步骤

 

1）将细胞以1×106接种于60mm培养板，80％汇合后转染，或者按照计划的方案处理。

 

2）24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素（真核表达载体上的抗性标记）进行培养（该步可选）。

 

3）48－72小时后用胰酶消化（或者用细胞刮子）收集细胞，PBS（加入FBS使终浓度为1-3%）洗两遍，弃上清，加入1ml70％预冷乙醇中，吹打均匀，-20℃或4℃固定12小时以上。

 

4）PBS（加入FBS使终浓度为1-3%）洗涤去乙醇，1000rpm,5min，洗两遍。

 

5）0.5mlPBS重悬细胞，加入PI和RNaseA至终浓度50?g/ml，37℃（或室温下）温浴30min。

 

6）用BD C6流式细胞仪测定周期。

 

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

 

RNaseA：10mg/ml

 

应用：通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数，可检测细胞的增殖、凋亡。