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流式细胞仪怎样检测细胞的周期

更新时间:2016-11-28浏览:2798次
   流式细胞术,顾名思义,是研究细胞的一种技术,但是它的研究对象不仅仅局限于真核细胞,还可以研究细菌、病毒以及各种蛋白等等。无论你是基础科研工作者还是临床医生,都用得上这项技术。与之相关的仪器----式细胞
  通过流式细胞仪可分析各时期的细胞百分数,来检测细胞的增殖、凋亡。
  流式细胞仪分析原理:通常用PI染细胞核,PI在一定波长的光下发出荧光,其强度与DNA含量成正比。绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物,分选细胞。
  流式细胞仪测量方法:
  1)将细胞以1×106接种于60mm培养板,80%汇合后转染。
  2)24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素(真核表达载体上的抗性标记)进行培养(该步可选)。
  3)48-72小时后用胰酶消化收集细胞,PBS洗两遍,弃上清,加入1ml 70%预冷乙醇中,吹打均匀,4℃固定12小时以上。
  4)PBS洗涤去乙醇,1000rpm,5min,洗两遍。
  5)0.5mlPBS重悬细胞,加入PI和RNaseA至终浓度50µg/ml,37℃温浴30 min。
  6)用流式细胞仪测定周期。
  PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
  RNaseA:10mg/ml。
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