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定量PCR仪的分子生物学研究

更新时间:2016-08-08浏览:1923次
   定量PCR仪是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。实时荧光定量PCR技术是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前定量PCR仪已广泛应用于分子生物学研究和医学研究等领域。
  定量PCR仪的分子生物学研究:
  1)基因表达研究:细胞因子是一种调节蛋白,它对免疫反应、炎症反应具有重要的调节作用,包括对淋巴细胞激活、增生、分化、存活和凋亡的调节。这些低分子蛋白由淋巴细胞、单核细胞和内皮细胞所分泌,其量的改变常常与一些疾病,如炎症反应、自身免疫性疾病、移植排斥反应等有密切的关系。由于所得到组织样本常常因为太小而不能满足在蛋白质水平的检测,另外,通常用的蛋白质检测方法的灵敏度也难以完成对极微量的蛋白产物的检测,所以应用PCR检测细胞因子mRNA表达水平就显得很有意义。实验研究表明:定量结肠直肠癌淋巴结的癌抗原mRNA的表达量,可以作为诊断癌症微转移的重要依据。
  2)单核苷酸多态性及突变分析:实时荧光定量PCR仪一个诱人的应用前景是用于检测基因突变和基因组的不稳定性。基因突变的检测基于两条探针,一条探针横跨突变位点,另一条为锚定探针,与无突变位点的靶序列杂交,两条探针用两种不同的发光基团标记。如靶序列中无突变,探针杂交便会降低杂交体的稳定性,从而降低其熔解温度。这样便可对突变和多态性进行分析。拉米夫定是有效治疗慢性乙型肝炎的抗病毒药物,但临床应用中不断有病毒变异的报道,这些变异可能是治疗失败或病毒对治疗无反应的原因。实时荧光定量PCR仪可以监测乙型肝炎患者服用拉米夫定后体内是否产生耐药突变病毒。
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